聚丙烯酰胺凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理是什么？

聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：
polyacrylamide
gelelectrophoresis，简称page）
作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n，n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap)，n，n，n’，n’
四甲基乙二胺(temed)作用下，聚合交联向成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-page）及sds-聚丙烯酰胺凝胶（sds-page）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。
sds-page仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（sds即十二烷基硫酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。
sds是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质
sds复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只是棒长的函数。这种电泳方法称为sds聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称sds—page)。由于sds
page可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么
sds—page后，就只出现一条蛋白质区带。sds—page可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、ph和凝胶孔径等所组成。

过硫酸铵就是引发剂，而TEMED可以催化过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。 聚丙烯胺凝胶由单体丙烯酰腋甲叉双丙烯酰胺聚合而成，催化聚合的常用方法有两种: 化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(AP)为催化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称PAGE ，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。 扩展资料： SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的灵敏度，一般只需要不到微克量级的蛋白质，而且通过电泳还可以同时得到关于分子量的情况，这些信息对于了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。 参考资料：百度百科-聚丙烯酰胺凝胶电泳

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中SDS的作用是

A.破坏蛋白质中氢键

B.通过疏水的尾巴与肽链中氨基酸的疏水侧链结合，来维持蛋白质的变性的状态

C.带有大量的负电荷，掩盖蛋白质本身带有的电荷，因此它可以消除各个蛋白质分子之间的电荷的差异

D.破坏蛋白质的二硫键

正确答案：通过疏水的尾巴与肽链中氨基酸的疏水侧链结合，来维持蛋白质的变性的状态;带有大量的负电荷，掩盖蛋白质本身带有的电荷，因此它可以消除各个蛋白质分子之间的电荷的差异

最大的不同是聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）用的蛋白质不做任何变性处理。 SDS-PAGE中的SDS是十二烷基磺酸钠，是蛋白质变性剂，SDS能拆散蛋白质的折叠结构，然后沿伸展的多肽链的表面吸附。使肽链带净负电荷，蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。 聚丙烯酰氨（PAGE）凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离。电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。蛋白质电泳（一般指SDS-PAGE）根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，电荷因素可以忽视。 扩展资料： 聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。 SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合形成密度相同的短棒状复合物，不同分子量的蛋白质形成的复合物的长度不同，其长度与蛋白质分子量呈正相关，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。 参考资料来源：百度百科-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳